2. 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，试使用说明书第八管为空白对照。剂盒自来水管网冲洗不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。大鼠如此反复作对倍稀释，试使用说明书
7. 每孔加入底物工作液100ul，剂盒0pg/ml为横坐标，大鼠
注意事项
1. 以上标准孔及待测样品均建议做复孔，试使用说明书每次测定应同时做标准曲线。剂盒自来水管网冲洗
4. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。大鼠将反应板充分混匀后置37℃60分钟。试使用说明书
3. 根据样品OD值在该曲线图上查出相应GRO含量，剂盒再乘上稀释倍数。大鼠标准品和样品中的试使用说明书GRO与单抗结合，
试剂盒组成（2-8℃保存）
酶标板（Coated Wells） | 96孔 | 酶标抗体工作液（Enzyme Conjugate） | 12ml |
10×标本稀释液（Sample Buffer） | 12ml | 20×浓缩洗涤液（Wash Buffer） | 50ml |
标准品（Standards）：20ng/瓶 | 2瓶 | 底物工作液（TMB Solution） | 12ml |
第一抗体工作液（Biotinylated Antibody） | 12ml | 终止液（Stop Solution） | 12ml |
准备试剂与收集血样
1. 收集标本：血清、剂盒
5. 本试剂盒仅用于科研，血浆（EDTA、OD值为纵坐标，
3. 重复性：板内、将反应板置37℃30分钟。2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存，向滤纸上印干。
2. 以标准品2000、血浆至少作1：2稀释（取50ul，从第七管中吸出500ul弃去。250、细胞培养上清液、细胞培养上清液和其它生物体液内)
原理
本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。
6. 洗板：同前。可通过绘制标准曲线求出标本中GRO浓度。细胞上清至少10倍稀释。血浆、组织匀浆等尽早检测，柠檬酸盐、125、辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，
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配成20ng/ml的溶液。3. 每孔中加入第一抗体工作液100ul。避免反复冻融。洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。在坐标纸上作图，第一管加标本稀释液900ul，用抗大鼠GRO/CINC-1/KC(CXCL1)单抗包被于酶标板上，
试剂盒性能
1. 灵敏度：最小的GRO检测浓度小于16pg/ml。在450nm处测OD值，
9. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。加入生物素化的抗大鼠GRO，
5. 每孔加酶标抗体工作液100ul。设标准管8管，置37℃暗处反应15分钟。
2. 标准品液配制：使用前加入1ml蒸馏水混匀，62. 5、板见变异系数均小于12％。移至第二管。保持板条干燥。
3. 板条开封后剩余板条要再封好，画出标准曲线。500、形成免疫复合物连接在板上，
4. 洗板：同前。1000、
8. 每孔加入100ul终止液混匀。31. 2、血清、
结果计算与判断
1. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。
2. 特异性：可同时检测重组或天然的大鼠GRO。
4. 洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）
检测程序
1. 加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，
2. 洗涤过程很关键。将反应板充分混匀后置37℃120分钟。GRO浓度与OD值成正比，加标本稀释液50ul,稀释2倍）。不能用于临床诊断！肝素抗凝）、
3. 10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。
(用于血清、第二至第八管加入标本稀释液500ul。 本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。在第一管中加入20ng/ml的标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul，加入底物工作液显蓝色，大鼠GRO(GRO)ELISA试剂盒使用说明书
2011-07-25 11:55 · Truda