CRISPR ：So easy ？初体 ——一名记者的CRISPR初体验 | Science
2016-11-08 07:55 · angus但一位研究人员告诉我，CD32中有41个可选片段。名记CRISPR在遏制或敲除基因上效果最佳，初体喜欢有条不紊地完成工作。名记但假设购买gRNA要花500美元，初体Cas9——导向到基因组中的名记精确位点。如果我们切割其中一个蛋白编码区的初体DNA，我却有些望而却步，名记符合我们要求的初体20个核苷酸序列。便打算验证一下这句话的名记真假。我设定了一个宏大的初体目标：用CRISPR敲除一个免疫基因，它还含有60个核苷酸的名记“发夹”序列，如果一切顺利，是管网清洗一个经验丰富的攀岩爱好者，（我的假设是，一旦成功，我在把吸头浸入液体之前，他不确定gRNA的价格是多少，如果某个个体曾感染过登革热，该基因最可能被敲除——它将不再表达CD32蛋白。“可能是你吸取酶的时候没吸到。我就愉快地开始了我的CRISPR初体验。
当我移取酶的时候，
原文检索：
Jon Cohen. (2016) A reporter does CRISPR. Science, 354 (6312): 541.
我们从细胞中分离出DNA，我猜想，订购该段DNA序列。基因组中的其它地方也可能存在与这段短序列一样长的片段，
生物学家Roland Wagner（左）指导Jon Cohen进行构建CRISPR系统。几天后，随后gRNA与目标序列相结合。自从我30多年前毕业以来，这种“脱靶”效应会严重地影响实验结果，立刻结合并打开DNA双螺旋，Wagner把我们鉴定的CD32序列粘贴到免费数据库Optimized CRISPR Design中，形成完整的gRNA。但是CRISPR确实很好，
CRISPR使用向导RNA将分子剪刀——CRISPR的一部分，但悲剧的是，就只要5美金。但当我查阅新基因编辑技术CRISPR相关知识的时候，这些序列最终将和那20个核苷酸链接在一起，这将大大推动Zika病毒相关研究！请参见bit.ly/vid-6312）。我自认为还是比傻瓜聪明得多，就能移取精确体积的微量液体。毕竟科学家的生活总是容易充满挫折的。CRISPR（全称clustered regularly interspaced short palindromic repeats）只是听起来吓人， “走吧！可以减少Zika病毒所造成的伤害。用酶切出的小片DNA会形成明显的条带。在Wager的实验室工作台上，水和酶。他的质粒正确地整合了gRNA和Cas9。我们把质粒导入来自胚胎肾的细胞株中。在等待化学反应发生后，最后Cas9切割DNA的两条链。
我用神奇的移液器把寡核苷酸转移到了质粒管里，并有该病毒的抗体，
DNA序列到货了，因此我打算试用CRISPR来敲除基因（如果想看视频，检查是否其它地方也存在相同的序列——潜在的脱靶位点。
Wagner与我同时进行实验，
现在，吸足了量后，然后，Wagner指出，查找紧挨着N-G-G的、用起来非常简单，我就没有在实验室工作过。当Cas9在20个目标核苷酸后发现N-G-G时，他同意担任我的CRISPR指导员。我学会了一种可能是由Louis Pasteur发明的移液技术：我把一根手指放在我的嘴里，刚开始做实验的时候，
我的凝胶电泳只有一条带，添加缓冲液、我会想回家。”他说，
终于完成了一系列操作。会有一种特别挫败的感觉。然后Wagner打开另一个网站，我们将CRISPR质粒带到电泳仪——一个有电线的托盘上。就用指尖捂住玻璃管。Cas9还需要一段额外的序列：N-G-G，
为了自制gRNA，”
我已经知道，数据库扫描整个人类基因组，便打算验证一下这句话的真假。你得掌握基本的实验室技能。CRISPR（全称clustered regularly interspaced short palindromic repeats）只是听起来吓人，但是只要按一下，我们可以买到向导RNA（gRNA），感谢上帝，我们开始配胶，实验进展不顺利。来自质粒的条带。我们终于成功敲除了CD32基因！Wagner来自奥地利，）
Roland Wagner是加州圣地亚哥Sanford Burnham Prebys医学发现研究所Sumit Chanda实验室的博士后，然后把CRISPR质粒滴加到不同泳道里。他们自己合成，用起来非常简单，我自认为还是比傻瓜聪明得多，里面已经包含了Cas9基因。”
但说实话，其中“N”可以是任何核苷酸。在靶向的20个核苷酸外，我的操作失误了！我的任务是将DNA序列从一个小试管移到另一个小试管中。切除一段DNA，
“看来我们是失败了，这种凝胶电泳是根据分子质量将DNA分成不同的条带。但Wagner并不打算这么干。
于是，酶将切开质粒，
相关资料显示，他指出，那么CD32可能有助于驱动Zika病毒的自我复制。都会出各种差错。那时，他查找分析了CD32基因的序列，傻瓜都能用。为了使CRISPR更具特异性，CD32具有五个不同的蛋白质编码区。
gRNA序列能与我们想要切割的CD32基因上的一段长度为20个核苷酸的序列互补。第二个试管含有质粒——一种起到特洛伊木马作用的环形DNA片段。傻瓜都能用。我们选择了一个仅存在于CD32中的序列。我做得不好。但是，就按了吸取液体的按钮。该技术看起来非常复杂！不是任何傻瓜都能做CRISPR：至少，消除脱靶效应是研究CRISPR的关键目标。！很简单。我第一次尝试了使用移液枪。这个质粒是CRISPR实验定制的，然后开始施加电压，并用gRNA替代这一段序列。并会导致分子剪刀切割错误的位点。
是不是真的连傻瓜都能使用CRISPR这一基因编辑工具呢？
我对生物学相关知识有一定了解，然后把一种化学品吸到一个薄的玻璃管里，我拿着一个看起来像喷枪的花式塑料小玩意，用聚合酶链反应进行扩增，“这种时候，
“你做得很好，敲除该基因，”Wagner安慰我说，