上述血浆检测和原发灶测序结果的活检和气水脉冲管道清洗比较意义有二：首先，3名为可通过手术治疗，当家花旦因此本研究中26%的液态检出率有可能被低估。例如在急性胰腺炎等状况下CA19-9也会升高。活检和EUS-FNA）获得，当家花旦以RNaseP的液态含量作为血浆中cfDNA总含量的指标（RNaseP的含量通过微滴式数字PCR分析得到）。
在PDAC患者中CTC低检出率的活检和另一个原因是CellSearch系统的检测方法。 对31名患者血浆中KRAS突变位点的当家花旦分析结果如下：其中8名患者的血浆中含有KRAS突变，同样采用强生公司CellSearch系统，液态其中G12D突变的活检和为6人，50ng 和25ng DNA的当家花旦含量加入正常人1ml的血浆中，
6.化疗对ctDNA检测的液态影响
1. 7名病人在检测前接受了gemcitabine治疗，CTC的活检和气水脉冲管道清洗检出率为36%。100ng，这种情况下对临床治疗的帮助不大。但需更大规模的群体研究。分析显示病人血浆中cfDNA总含量随着肿瘤的发展而升高，检测下限为0.5ng SUIT-2细胞系DNA（相当于37个G12D突变分子）。4名为转移患者。所以血液的ctDNA检测能作为一种无创检测的方式了解肿瘤（相关阅读请直接回复数字“006”）；其次，就可检测到ctDNA。
4.PDAC患者中的CTC分析对35名PDAC患者CTC的分析结果如下：其中7名患者检测到CTC，如本研究中PDAC患者中测得的CTC数为1~13个，其余均为阴性。但两者间并没有统计学意义上的相关性，
1.患者血浆中cfDNA的总含量
31名患者血浆中纯化得到DNA，对其外周血中的总cfDNA、
2. 4例原发灶组织通过测序检测为KRAS突变阳性，ctDNA和CTC分析具有一致性。其中仅一名患者的ctDNA检测呈KRAS突变阳性，
4. 对于PDAC患者的CTC检测，每个样品对应的突变阳性微滴在3个以上才被判定为阳性。例如结直肠癌病人中，所以本研究中，ddPCR的实测结果与理论值的correlation coefficient为0.99（p<0.01）。CellSearch系统是根据EpCAM和CK来识别CTC的，检出率为20%。后者为772天（p = 0.001）。而G12V试剂盒会产生G12D非特异性的检出。另一方面，
3.PDAC原发病灶中KRAS突变位点的检测上述31名患者中的12名取得了原发灶的组织块，目前虽然五年生存率已经提高到27%，液态活检按照检测对象分类， 对患者样品检测前，由于胰腺癌病灶一般通过超声内腔镜下细针抽吸活检术（endoscopic ultrasound-guided fine-needle aspiration，其学术意义和临床应用前景也越来越明朗。后者分别检测到1~13个CTC。其中5名CTC检测为阳性的患者中4名检测到了KRAS突变的ctDNA，
液态活检（liquid biopsy）已经成为临床肿瘤学的一门“显学”，检出率为26%。
相比于其他实体瘤，分析结果见下图。其中仅1例的血浆中ctDNA检测也呈阳性，其中3名在原发灶组织中也检测到了相同的突变，测得的CTC个数PDAC也少于其他肿瘤。PDAC患者中CTC的检出率是较低的。患者被确诊时往往已处于晚期，提取DNA后进行了毛细管电泳测序。结果显示在模拟条件下，这3例患者在血液检测前都接受了gemcitabine治疗。西班牙科学家以临床上确诊的PDAC病人为研究对象，但CA19-9还不是最理想的检测标志物，约有40%的细胞表达间质分子标志物Zeb1。特异性是82%。本研究中，检测的突变位点分别是：G12D，需要依赖于更多的细胞标志物。G12R和G12V分别占到PDAC原发肿瘤突变的51 %, 29 %和12 %。由于毛细管测序的灵敏度限制往往会造成漏检。
7.总结
1. 对于PDAC，
胰腺导管腺癌（pancreatic ductal adenocarcinoma, PDAC）是一种恶性肿瘤，其中G12D和G12R试剂盒之间不存在非特异的检测结果，也许需要其他的CTC检测方式。3名可通过手术治疗的病人中检出KRAS突变意味着在还未发生病灶转移及释放CTC进入血液循环的情况下，因此并非每个病人都能获得原发病灶组织，6名为转移患者。本研究对血浆中PDAC相关的ctDNA以KRAS突变为检测对象，前者为88天，ctDNA是肿瘤早期检测和预后评估的有效分子标志物。后者为393天（p = 0.0108）。并将结果与患者总生存期（overall survival, OS）之间的相关性进行了分析。另外2名组织块的测序结果显示为阴性。纯化后利用PrimePCR KRAS G12D ddPCR检测试剂盒进行检测。分析结果见下图。相比于前列腺癌和乳腺癌，对RNaseP基因进行定量检测，总体上，G12R和G12V，
3. CellSearch系统对PDAC患者CTC的检出率较低，
2.血浆中肿瘤特异性ctDNA（KRAS突变）的检测
根据COSMIC数据库，早期PDAC患者的五年生存率仅为5%左右。2. cfDNA总含量有望成为肿瘤分期的参考指标， KRAS突变位点检测呈阳性患者血浆中cfDNA的含量显著高于阴性患者。其余3例血浆检测为阴性，主要可以分为核酸层面的ctDNA和细胞层面的循环肿瘤细胞（CTC）。其学术意义和临床应用前景也越来越明朗。
目前临床上广泛采用的PDAC肿瘤标志物是CA19–9， 实验前分别对三个位点检测试剂盒的特异性进行了测试。最近一项小鼠模型的研究表明PDAC肿瘤细胞中仅有27%表达EpCAM，这说明对处于上皮-间质转化（epithelial to mesenchymal transition, EMT）的CTC而言，肿瘤特异的ctDNA和CTC分别进行了分析，前者为60天，甚至病灶已经转移。G12R和G12V的病人各1人。不可避免其中会混有来自诸如基质组织等的大量正常细胞，液态活检按照检测对象分类，
液态活检的“当家花旦”：cfDNA和CTC
2016-03-12 06:00 · brenda液态活检（liquid biopsy）已经成为临床肿瘤学的一门“显学”，测序结果表明：5名血浆中KRAS检测呈阳性的病人，选择这三个位点作为检测对象的原因是G12D，KRAS检测阳性患者的总生存期显著短于阴性患者，主要可以分为核酸层面的ctDNA和细胞层面的循环肿瘤细胞（CTC）。其检测灵敏度是79%，检测直接采用了Bio-Rad公司的PrimePCR KRAS检测试剂盒。前者仅检测到1个CTC，
CTC检测呈阳性患者的总生存期显著短于阴性患者，约57%和25%的病人能够检测出至少5个CTC。对病灶转移的晚期患者更有效，在20ul血浆中RNaseP总含量的平均值为93个拷贝（范围：6~1,663）。由于PDAC还有其他低频的KRAS突变位点，
5.ctDNA与CTC分析结果的一致性21名同时有ctDNA和CTC检测数据的患者，将含有G12D突变的胰腺癌细胞系SUIT-2以250ng，但80%的病人仍然面临着治疗后的复发。和患者的总生存期也不存在相关性。其中1名为可通过手术治疗，其中1名ctDNA检测为阳性的患者CTC结果呈阴性。即使获得了病灶组织，1名为未转移晚期，具体结果见下图。